产品货号：
HR8111
中文名称：
无去垢剂细胞裂解液
英文名称：
产品规格：
100ml
发货周期：
1～3天
产品价格：
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无去垢剂细胞裂解液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等下游实验。
保存：2～8℃，有效期1年。
离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒
相关搜索：无去垢剂细胞裂解液，细胞裂解液，组织裂解液
| 组分 | 规格 |
| 组分A：细胞裂解液（无去垢剂） | 100mL |
| 组分B：蛋白酶抑制剂混合物 | 400μL |
保存：2～8℃，有效期1年。
离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
- 如果试剂盒不能短时间用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
- 细胞裂解
- 裂解液制备：
每1mL冷的细胞裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。- 可以根据需要加入其它蛋白酶抑制剂。
- 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
- 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
- 可以根据需要加入其它蛋白酶抑制剂。
- 取5～10×106个细胞，在4℃，1000×g条件离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
- 细胞可以收集后裂解，也可以直接原位裂解，根据操作习惯选择。
- 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
- 每5×106个细胞中加入500μL冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
- 每106个细胞，大约10mg或10μL压积，加100μL RIPA裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或一个75cm2培养瓶加1mL。裂解液和细胞应充分接触。如果RIPA裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低。
- 原位裂解时如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量。
- 每106个细胞，大约10mg或10μL压积，加100μL RIPA裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或一个75cm2培养瓶加1mL。裂解液和细胞应充分接触。如果RIPA裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低。
- 在4℃，12000～14000×g条件下离心15分钟。
- 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
- 裂解液制备：
- 组织裂解
- 裂解液制备：
每1mL冷的裂解液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 - 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1mL裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
- 如果组织样品细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
- 一般按组织：提取液用量1∶10(w/v)左右加入提取液即可。如果需要提高得到的蛋白样品浓度，可以将组织：提取液用量比例调整为1：5。
- 也可用液氮研磨的方法。
- 如果组织样品细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
- 将组织匀浆液在4℃振荡15～25分钟。
- 在4℃，12000～14000×g条件下离心15分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
- 上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。
- 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
- 上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
- 裂解液制备：
- 细胞裂解速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。 - 蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 - 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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